抗体偶联药物（antibody-drug conjugate，ADC） 行为新式抗体药物受到日益温雅，临床上多用于肿瘤调治。ADC 是单克隆抗体通过集合臂与细胞毒性小分子化合物共价偶联形成的复合物。该类药物应用了抗体的高特异性和细胞毒性药物对肿瘤细胞较强的杀伤才智，联结两者的上风，用以调治恶性肿瘤。

ADC 的作用机制暴露图

行为一类新兴药物，ADC 的特有结构在升迁药效、裁汰毒性的同期，也使其质料分析职责更具挑战性。药物-抗体比（drug-to-antibody ratio，DAR），即ADC中抗体所佩戴的细胞毒性小分子的数目，是ADC质料阻挡的中枢观念。

DAR 决定了作用于肿瘤细胞的药物水平，可影响ADC的机体毒性。若 DAR 过低，则反应出抗体的佩戴着力低，调治后果较差；若DAR过高，则ADC的毒性大大增多。

DAR测定的本领有多种，常常包括质谱法（mass spectrometry，MS）、紫外-可见分光光度法（ultraviolet-visible spectrometry，UV-Vis）和色谱法等，可把柄ADC的特质及偶联工艺等因素禁受合乎的本领，具体如下：

1、紫外/可见光谱法

紫外/可见光谱法是检测DAR值最疏漏踏实的本领，这种本领需要抗体和小分子药物具有不同的最大罗致波长，诀别计较二者的浓度进而获取ADC的DAR值，适用于多种ADC。该本领较为疏漏，操作疏漏，早期应用较多，然则精准度不够，且只可获取平均DAR而无法得知样品的 DAR 散布等防备信息。

使用紫外/可见光谱法领先需要骄横三个前提：

① 细胞毒性小分子应具有邃密的吸光性能；

② 细胞毒性小分子和抗体的最大罗致波长不同；

③ 两者联结成的 ADC 分子不影响这两种物资各自的吸光性能，因为集合臂一般莫得吸光基团，是以不错忽略集合臂的吸光度 。

2、色谱法

色谱法包括疏水作用色谱（hydrophobic interaction chromatog raphy，HIC）和反相高效液相色谱法(reversed phase high performance liquid chromatography，RP-HPLC)两种，适用于测定半胱氨酸偶联的ADC。疏水作用色谱法能将不同DAR值的组分把柄疏水性的互异分离开，且保合手ADC分子的结构齐备性；反相高效液相色谱法需要先将抗体回答获取轻、重链再进行分析，可用于补充考据疏水作用色谱法的收尾，况且适用于质谱分析。

这两种色谱本领在 ADC，分析中的应用较其他色谱本领多，均适用于异质性较低的 ADC 的分析，关于身分较复杂的 ADC 如偶联位点为赖氨酸残基的ADC，则难以达到理念念的分离度。一般使用 HIC 分离样品后不会酿成抗体结构的破裂，而 RP-HPLC 需要用回答反应将抗体的重链和轻链分离，不适用于集合臂为二硫键的 ADC，因为回答反应会将二硫键裂解，无法保证细胞毒性小分子与抗体的集合。

3、质谱法

质谱法把柄DAR不同的分子在离子源中产生不同质荷比的离子，杀青其在质料分析器中的分离，因此可用质谱法杀青 ADC 分子的DAR分析。常用的质料分析器为遨游时候质料分析器（time of flight mass spectrometer，TOF）和离子肼质料分 析器，可获取较高分辨图谱。电离相貌则常禁受基质扶植激光理解电离（matrix-assisted laser desorption ionization，MALDI），这种电离相貌获取的插手离子峰较少，利于分析。

连年来，非变性质谱分析（native-mass spectrome try，native-MS）在 ADC 的分析方面应用越来越多。一 般而言，native-MS 是在较高水平上探讨齐备卵白质 偏执复合物的有劲器具，可提供样品的分子量和亚基摆列空间结构等信息 。与传统 MS 比较，该技巧不错保证被分析卵白的结构齐备性，同期具有更高的颖慧度、分辨率和更快的分析速率，况且可杀青同分异构体的分离和糖基化景象的测定。

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